1. 紫外-可见分光光度法（UV-Vis）

原理：
视黄醇及其衍生物在特定波长下有特征性吸收峰（如视黄醇在325 nm附近有最大吸收）。通过测定样品在特定波长下的吸光度，与标准曲线对比即可定量。
步骤：

• 样品预处理：用有机溶剂（如乙醇、己烷）提取视黄醇，去除干扰物质。
• 测定吸光度，计算浓度。
  局限性：
  易受其他吸光物质干扰（如胡萝卜素），需纯化步骤。

2. 高效液相色谱法（HPLC）

原理：
利用色谱分离技术将视黄醇与其他成分分离，再通过紫外或荧光检测器定量。
步骤：

• 样品皂化（水解视黄酯为游离视黄醇）或直接提取。
• HPLC分离（常用反相C18柱）。
• 检测器定量（紫外检测器325 nm或荧光检测器激发325 nm/发射470 nm）。
  优势：
  高灵敏度、高特异性，可同时测定多种形式（如视黄醇、视黄酯、β-胡萝卜素）。

3. 荧光分析法

原理：
视黄醇在特定激发光（约325 nm）下发射荧光（约470 nm），荧光强度与浓度成正比。
步骤：

• 有机溶剂提取后直接测定荧光。
• 需避免光氧化（实验需避光操作）。
  优势：
  灵敏度高于紫外法，适合低浓度样本。

4. 酶联免疫吸附试验（ELISA）

原理：
利用视黄醇特异性抗体进行免疫反应，通过酶标二抗显色定量。
适用场景：
适用于复杂生物样本（如血清、组织），但抗体可能与其他维生素A衍生物交叉反应。

5. 质谱法（LC-MS/MS）

原理：
结合液相色谱与质谱，通过分子量和特征碎片离子精确测定视黄醇及其代谢物。
优势：
超高灵敏度、可区分异构体，适用于科研或临床精准检测。

关键注意事项

1. 样品保护：视黄醇对光、氧敏感，需避光操作并添加抗氧化剂（如BHT）。
2. 皂化步骤：测定总维生素A时需水解视黄酯（如用KOH乙醇溶液）。
3. 标准品选择：需与待测物形式一致（如游离视黄醇或视黄酯）。

根据样本类型（血清、组织、食品）和检测需求（灵敏度、通量），可选择合适方法。HPLC和LC-MS/MS是科研和临床的黄金标准，而UV-Vis和ELISA更适合常规筛查。