液质联用技术（LCMS）在视黄醛测定中的应用与方案

视黄醛（Retinal）是维生素A的醛衍生物，在视觉循环、细胞分化和免疫调节中发挥关键作用。其测定在临床诊断、营养学研究及药物开发中具有重要意义。液质联用技术（LCMS）因其高灵敏度、高特异性和准确性，已成为视黄醛定性和定量分析的首选方法。本文将全面介绍LCMS测定视黄醛的方法开发、优化要点及常见问题解决方案。

一、为什么选择LCMS测定视黄醛？

视黄醛易氧化、光敏且存在多种异构体（如全反式、11顺式），传统分析方法（如HPLCUV）往往缺乏足够的灵敏度和特异性。LCMS通过色谱分离与质谱检测的结合，能够：

• 准确区分视黄醛异构体
• 实现痕量检测（可达pg/mL级别）
• 避免复杂基质（如血清、组织提取物）的干扰

二、方法开发关键步骤

1. 样品前处理

视黄醛对光和氧气敏感，需全程避光操作并使用抗氧化剂（如BHT）。常用提取方法：

• 血清/血浆样本：蛋白沉淀（乙腈或甲醇）后固相萃取（SPE）净化
• 组织样本：匀浆后液液萃取（正己烷/乙醚混合溶剂）
• 细胞样本：裂解后直接有机溶剂提取

2. 色谱条件优化

• 色谱柱：C18反相柱（如Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1×100 mm, 1.7 μm）
• 流动相：
  • A相：水（含0.1%甲酸）
  • B相：甲醇或乙腈（含0.1%甲酸）
• 梯度程序：初始20% B，5分钟内升至98% B，保持2分钟
• 流速：0.3 mL/min，柱温：40℃

3. 质谱参数设置

采用ESI正离子模式，多反应监测（MRM）提升特异性：

• 离子对：m/z 285.1121.0（定量离子），285.193.0（定性离子）
• 离子源参数：
  • 毛细管电压：3.5 kV
  • 源温度：150℃
  • 脱溶剂气温度：500℃
  • 锥孔气/脱溶剂气流速：根据仪器优化

三、方法验证要点

根据ICH指南需验证：

• 线性范围：0.1100 ng/mL（r²>0.99）